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酶活测定方法简介

作者: 特种酶制剂事业部           点击数: 0           发表时间: 2017-05-27 9:47:14

1、还原法

酶与底物在特定的条件下反应,酶可以促使底物释放出还原性的基团。在此反应体系中添加化学试剂,酶促反应的产物可与该化学试剂发生反应,生成有色物质。通过在特定的波长下比色,即可求出还原产物的含量,从而计算出酶活力的大小。

2、色原底物法

通过底物与特定的可溶性生色基团物质结合,合成人工底物。该底物与酶发生反应后,生色基团可被释放出来,用分光光度法即可测定颜色的深浅,在与已知标准酶所做的曲线比较后,即可求出待测酶的活力。

3、粘度法

该法常用于测定纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶的活力。木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情况下可形成极高的粘度,当酶作用于粘性底物时木聚糖和β-葡聚糖会被切割成较小的分子使其粘度大为降低。基于Poiseuille定律我们知道,只要测定一定条件下溶剂和样品溶液的运动粘度,便可计算特性粘数,并以此来判断酶的活力。

4、高压液相色谱法

酶与其底物在特定的条件下充分反应后,在一定的色谱条件下从反应体系中提取溶液进行色谱分析,认真记录保留时间和色谱图,测量各个样的峰高和半峰高,计算出酶促反应生成物的含量,从而换算出酶活力的数值。

5、免疫学方法

常用于酶活性分析的免疫学方法包括:免疫电泳法、免疫凝胶扩散法。这两种方法都是根据酶与其抗体之间可发生特定的沉淀反应,通过待测酶和标准酶的比较,最终确定酶活力。免疫学方法检侧度非常灵敏,可检侧出经过极度稀释后样品中的酶蛋白,但其缺点是不同厂家生产的酶产品需要有不同特定的抗体发生反应。

6、琼脂凝胶扩散法

将酶作用的底物与琼脂混合熔融后,倒入培养皿中或载波片上制成琼脂平板。用打孔器在琼脂平面上打出一个约4-5mm半径的小孔。在点加酶样并培养24h以后,用染色剂显色或用展开剂展开显出水解区,利用水解直径和酶活力关系测定酶活力。

   安琪特种酶制剂事业部对于酶的测定有深入的研究,包括常用的淀粉类水解酶、糖化酶、蛋白酶以及核酸酶、脱氨酶、脱卤酶、酮基还原酶、α-环状糊精葡萄糖基转移酶等新型酶制剂,检测技术的稳步提高给研发工作提供了有力的支持,保障了产品的生产质量,也为市场的开发打下良好基础。

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